7.26.2010

ÁCIDOS NUCLEICOS

EFECTO HIPERCRÓMICO DEL ADN





Al calentar DNA se rompen los puentes de hidrógeno y las hebras se separan, lo que se conoce como denaturación. Si se vuelven a juntar las cadenas bajo condiciones adecuadas se habla de renaturación.
Al agregar a una cadena otra molécula con secuencias que interaccionen, se habla de hibridización.
Existen moléculas que degradan el DNA y RNA, las endonucleasas lo hacen desde el interior, las exonucleasas, desde los extremos. Las enzimas de restricción son endonucleasas para una secuencia específica.
Las proteínas se pueden cuantificar leyendo a luz ultravioleta: 220-230 nm (unión peptídica); 280 nm (aromáticos: triptofano, fenilalanina). Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta, con un máximo de absorción a 260 nm, por las bases, que son aromáticas. De esta manera se puede medir la concentración.
Ambas cadenas se mantienen unidas por puentes de hidrógeno y reacciones hidrofóbicas. Las  cadenas se separan por calor.
Si el ADN es calentado por 5 minutos y se hace el espectro, se obtiene un espectro de absorción más alto que el ADN no denaturado porque las bases absorben más, lo que se conoce como efecto hipercrómico.
Si se mide la absorbancia a 260 nm pero a distintas temperaturas (curva de denaturación térmica), a cierta temperatura la absorbancia aumenta abruptamente en un 25 a 30%.
Distintos ADN aumentan la absorbancia abruptamente a distintas temperaturas dependiendo del número de puentes de hidrógeno.
La temperatura de fusión de DNA, es aquella donde el ADN está 50% denaturado.

El efecto hipercrómico se utiliza para cuantificar la cantidad de ADN que se tiene en forma de doble hebra o de cadena sencilla. Al representar la temperatura frente a la absorción a 280 nm se observa una curva sigmoidea, con lo que se deduce que las fuerzas que estabilizan la estructura helicoidal son cooperativas, es decir, cuesta mucho romper las primeras interacciones estabilizantes, pero una vez conseguido el resto se rompe muy fácilmente. Hay un umbral mínimo de energía a partir del cual el proceso de desnaturalización es muy rápido.

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